신형 코로나바이러스(SARS-Cov-2) 핵산 검출 키트
New C오로navirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flu광석scent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【P로덕t name ]신형 코로나바이러스(SARS-Cov-2) 핵산 검출 키트(형광 RT-PCR 프로브 방식)
【Packaging spec만약에cations ]25개 테스트/키트
【Intended us나이]
이 키트는 의료 서비스 제공자가 코로나19로 의심되는 개인의 비인두 면봉, 구인두(목) 면봉, 전비강 면봉, 중비갑개 면봉, 비강 세척제 및 비강 흡인물에서 신형 코로나바이러스의 핵산을 정성적으로 검출하는 데 사용됩니다. 신형 코로나바이러스의 ORF1ab 및 N 유전자의 검출은 신형 코로나바이러스 감염의 보조 진단 및 역학적 모니터링에 사용될 수 있습니다.
【Principles of the p로세dure ]
이 키트는 새로운 코로나바이러스(SARS-Cov-2) ORF1ab 및 N 유전자 서열용으로 설계된 특정 TaqMan 프로브 및 특정 프라이머용으로 설계되었습니다. PCR 반응액에는 표적의 특이적 검출을 위한 3세트의 특정 프라이머와 형광 프로브가 포함되어 있으며, 추가적인 특정 프라이머와 형광 프로브 세트는 내인성 하우스키핑 유전자 검출을 위한 키트의 내부 표준 컨트롤로 사용됩니다.
테스트 원리는 PCR 반응에서 Taq 효소의 엑소뉴클레아제 활성에 의해 특정 형광 프로브가 소화 및 분해되어 리포터 형광기와 소광 형광기가 분리되어 형광 모니터링 시스템이 형광을 받을 수 있도록 하는 것입니다. 신호, 그리고 PCR 증폭의 농축 효과를 통해 프로브의 형광 신호는 설정된 임계값-Ct 값(Cycle Threshold)에 도달합니다. 표적 앰플리콘이 없는 경우 프로브의 리포터 그룹은 담금질 그룹에 가깝습니다. 이때, 형광 공명 에너지 전달이 일어나며, 리포터 그룹의 형광은 켄칭 그룹에 의해 켄칭되어 형광 PCR 장비로는 형광 신호를 검출할 수 없게 된다.
테스트 중 시약 사용을 모니터링하기 위해 키트에는 양성 대조군과 음성 대조군이 장착되어 있습니다. 양성 대조군에는 표적 부위 재조합 플라스미드가 포함되어 있고 음성 대조군에는 환경 오염을 모니터링하는 데 사용되는 증류수입니다. 테스트 시 양성 대조군과 음성 대조군을 동시에 설정하는 것이 좋습니다.
【Main com포넨ts ]
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | 컴포넌트엔트 | |
남e | 투기화 | 퀀트ity | 퀀트ity | |
양성 대조군 | 180μL/바이알 | 1 | 1 | 인공적으로 제작된 플라스미드, 증류수 |
음성 대조군 | 180μL/바이알 | 1 | 1 | 증류수 |
SARS-Cov-2 믹스 | 358.5μL/바이알 | 1 | / | 특정 프라이머 쌍, 특이 검출 형광 프로브, dNTPs, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, 증류수 등 |
효소 믹스 | 16.5μL/바이알 | 1 | / | Taq 효소, 역전사 효소, UNG 효소 등 |
SARS-Cov-2 믹스(동결건조) | 25개 테스트/바이알 | / | 1 | 특정 프라이머 쌍, 특이 검출 형광 프로브, dNTP, Taq 효소, 역전사효소, 증류수 등 |
2x 버퍼 | 375μL/바이알 | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, 증류수 등 |
메모:(1) 다른 배치 키트의 구성 요소는 혼합되거나 상호 교환될 수 없습니다.
(2) 나만의 시약 준비: 핵산 추출 키트.
【Storage cond이티ons 그리고 expiration date ]
For BST-SARS-25:-20±5℃에서 장기간 운송 및 보관하십시오.
For BST-SARS-DR-25:실온에서 운송하십시오. -20±5℃에서 장기간 보관하십시오.
반복적인 동결-해동 주기를 피하십시오. 유효기간은 12개월로 잠정 설정되었습니다.
제조일자와 사용일자는 라벨을 참조하세요.
처음 개봉한 후 시약은 -20±5°C에서 1개월 이내 또는 시약 기간이 끝날 때까지(둘 중 먼저 도래하는 날짜) 반복되는 동결-해동 주기와 시약 동결 횟수를 피하기 위해 보관할 수 있습니다. -해동 주기는 6회를 초과해서는 안 됩니다.
【Applicable instrument]ABI 7500, SLAN-96P, 로슈-LightCycler-480.
【Sample requirements ]
1. 적용 가능한 샘플 유형: 추출된 핵산 용액.
2. 샘플 보관 및 운송: -20±5℃에서 6개월간 보관합니다. 샘플을 6회 이상 냉동 및 해동하지 마십시오.
【T에스트ing met벽돌 상자]
1.Nucleic acid extraction
바이러스 핵산 추출에 적합한 핵산 추출 키트를 선택하고 해당 키트 지침을 따르십시오. Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd.에서 생산한 핵산 추출 및 정제 키트 또는 이에 상응하는 핵산 정제 키트를 사용하는 것이 좋습니다.
2. R에아tion 수확량nt prep아라tion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) SARS-Cov-2 Mix와 Enzyme Mix를 꺼내고 Vortex 장치를 이용하여 실온에서 완전히 녹인 후 짧게 원심분리한다.
(2) SARS-Cov-2 Mix 358.5uL에 Enzyme Mix 16.5uL를 첨가하고 잘 섞어 혼합반응액을 얻었다.
(3) 깨끗한 0.2 mL PCR octal tube를 준비하고, 웰당 위의 혼합반응액 15uL를 표시한다.
(4) 정제된 핵산 용액 15 μL, 양성 대조군과 음성 대조군을 첨가하고 팔진관 캡을 조심스럽게 덮습니다.
(5) 거꾸로 뒤집어 잘 섞은 후 빠르게 원심분리하여 튜브 바닥에 액체가 농축되도록 한다.
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2.2 For BST-특별 행정구S-DR-25:
( 1) SARS-Cov-2 Mix((동결 건조)에 375ul 2x Buffer를 첨가하여 반응 혼합물을 준비합니다. 피펫팅으로 잘 섞은 후 잠시 원심분리합니다. (반응 혼합물이 준비된 후에는 -20℃에서 보관하는 것이 좋습니다. 장기 보관.)
(2) 깨끗한 0.2 mL PCR 옥탈 튜브를 준비하고 웰당 15μL의 반응 혼합물을 표시합니다.
(3) 정제된 핵산용액 15μL, 양성대조군, 음성대조군을 첨가하고 팔극관 캡을 조심스럽게 덮는다.
(4) 거꾸로 뒤집어 잘 섞은 후 빠르게 원심분리하여 튜브 바닥에 액체가 농축되도록 한다.
3. PCR amp리피cation (작동 설정은 기기 설명서를 참조하세요.)
3. 1 PCR 8-tube를 형광 PCR 장비의 샘플 챔버에 넣고 로딩 순서에 따라 테스트할 샘플, 양성 대조군, 음성 대조군을 설정합니다.
3.2 형광 검출 채널:
(1) ORF1ab 유전자는 FAM의 검출 채널을 선택합니다(리포터: FAM, Quencher: 없음).
(2) N 유전자는 VIC의 검출 채널을 선택합니다(리포터: VIC, Quencher: 없음).
(3) 내부 표준 유전자는 CY5의 검출 채널을 선택합니다(Reporter: CY5, Quencher: None).
(4) Passive Reference는 ROX로 설정됩니다.
3.3 PCR 프로그램 매개변수 설정:
단계 | 온도(℃) | 시간 | 사이클 수 | |
1 | 역전사 반응 | 50 | 15분 | 1 |
2 | Taq 효소 활성화 | 95 | 2.5분 | 1 |
3 | Taq 효소 활성화 | 93 | 10초 | 43 |
어닐링 확장 및 형광 획득 | 55 | 30초 |
설정 후 파일을 저장하고 반응 프로그램을 실행해 보세요..
4.Results analysis
프로그램 종료 후 결과가 자동으로 저장되고 증폭 곡선이 분석됩니다. 증폭 곡선은 장비 기본 임계값으로 설정됩니다.
【Explanation of test resuㅋㅋㅋ ]
1. 실험의 타당성 결정: 양성 대조군 FAM, VIC 채널은 일반적인 증폭 곡선을 가져야 하며 Ct 값은 일반적으로 34 미만이지만 다양한 기기의 다른 임계값 설정으로 인해 변동될 수 있습니다. 음성 대조 FAM, VIC 채널은 증폭되지 않은 Ct여야 합니다. 위의 요구 사항이 동시에 충족되어야 한다는 데 동의합니다. 그렇지 않으면 이 테스트는 유효하지 않습니다.
2. 결과판정
FAM/VIC 채널 | 판정 결과 |
Cct<37 | 샘플 테스트가 양성입니다. |
37≤Ct<40 | 증폭 곡선은 S자 모양이므로 의심스러운 샘플을 다시 검사해야 합니다. 재심사 결과가 일치하면 양성으로 판정하고, 그렇지 않으면 음성으로 판정한다. |
Ct≥40 또는 증폭 없음 | 검체 검사 결과 음성(또는 키트 검출 하한치 미만) |
참고: ( 1) FAM 채널과 VIC 채널이 동시에 양성인 경우 SARS-Cov-2는 양성으로 판단됩니다.
(2) FAM 채널 또는 VIC 채널이 양성이고 다른 채널이 음성인 경우 테스트를 반복해야 합니다. 동시에 양성이면 SARS-Cov-2 양성으로 판정되고, 그렇지 않으면 SARS-Cov-2 음성으로 판정됩니다.